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超低溫冷凍影響卵母細胞CD9的表達

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2016-10-27 8:04:14 人氣:20 加入收藏 標簽:超低溫冷凍

卵母細胞的超低溫冷凍保存過程中溫度的劇烈波動對卵母細胞dnA和細胞骨架造成損傷,如冷凍保護劑的滲入導致細胞結構的損傷,主要影響微絲微管、染色體、細胞膜等結構,進而引起一定程度的細胞分子水平上的損傷,包括dnA、RNA損傷及重要蛋白的損傷。冷凍解凍過程中雖然避免了細胞內冰晶的形成,但是溫度的變化會使細胞外液形成冰晶,而卵母細胞冷凍解凍過程中的皺縮和張復對膜的損傷也不可忽視,這樣將導致細胞受到化學和物理雙重損傷。本試驗對綿羊GV期和MⅡ期冷凍前后卵母細胞進行WEstERnbLottinG分析和實時熒光定量PCR檢測,結果發現新鮮MⅡ期卵母細胞CD9蛋白含量和mRNA表達最高,而冷凍GV期卵母細胞中CD9蛋白含量和mRNA表達量最低。mRNA表達量降低很有可能是因為mRNA是偶極水分子、核酸及磷酸鹽結構的單鏈分子,超低溫冷凍過程中高濃度的抗凍保護劑使細胞中mRNA周圍水分子大量脫出,有利于mRNA的展開,使之與RNA酶相接觸而發生mRNA的水解。蛋白的降低除了上述的物理性損傷外,還與CD9mRNA降低有關。對于超低溫冷凍保存對綿羊卵母細胞CD9表達量的影響,今后可作為一個指標,檢測卵母細胞超低溫冷凍方法和運輸及冷凍解凍后的受精率是否達到標準,進而來判斷處理方法的可行性。

結論:隨著綿羊卵泡的形成,在綿羊初級卵泡開始就檢測到CD9熒光信號,隨著卵泡的生長在細胞膜和顆粒細胞上CD9熒光信號變強,且隨著卵母細胞的成熟CD9蛋白含量明顯增加,CD9mRNA表達量顯著增加,而超低溫冷凍又使之均降低。膜蛋白CD9發生異常變化,是直接或間接導致受精率、存活率甚至發育潛力下降的重要原因之一。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Industry/1592.html
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