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低溫冷凍保存是保存女性生育力安全有效的方法

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2017-01-09 8:08:50 人氣:16 加入收藏 標簽:低溫冷凍 冷凍保存

體外受精-胚胎移植技術的廣泛應用給廣大不孕癥患者帶來了福音。胚胎冷凍及胚胎復蘇技術的日益成熟在女性生育力保存、供卵、避免剩余胚胎浪費及通過減少移植胚胎數目降低多胎妊娠等多方面具有重要的意義,是目前唯一被北美生殖醫學委員會認可的臨床可開展的生育力保存方法。隨著我國二孩政策的實施,部分有冷凍保存胚胎的患者前來實施冷凍胚胎復蘇后移植,即凍融胚胎移植。胚胎冷凍保存期間胚胎發育潛能是否降低,報道存在爭議。

過分析胚胎冷凍保存時間、不同凍融胚胎移植周期與臨床妊娠結局的相關性,探討胚胎玻璃化冷凍在女性生育力保存中的意義。

1資料與方法

1、1 臨床資料回顧性分析2014年1月-2015年9月在本中心實施凍融胚胎移植的600例患者,年齡23~46歲,不孕原因主要為輸卵管因素、子宮內膜異位癥、不明原因、排卵障礙及男性因素。按照冷凍保存時間分為A組(1~12個月)、B組(13~18個月)、C組(19~24個月)、D組(>24個月);根據凍融胚胎移植周期數分為第1個移植周期組、第2個移植周期組、第3個移植周期組、≥第4個移植周期組。

1、2 方法

1、2、1 控制性超促排卵和子宮內膜準備控制性超促排卵方案依據患者情況而定,有長方案、短方案、微刺激、自然周期取卵等多種臨床方案。當主導卵泡直徑達18mm時肌內注射人絨毛膜促性腺激素(hCG)5000~10000U,35h后于B超引導下經陰道穿刺取卵。凍融胚胎移植中子宮內膜準備按照本中心臨床技術操作規程執行。

1、2、2 IVF-ET實驗室操作應用丹麥Vitrolife系列序貫胚胎培養液,并嚴格依據說明書執行。取卵后常規培養3~4h后按照每枚卵子3~5萬條精子受精,受精4~5h后拆除部分卵子顆粒細胞,通過觀察第二極體排出判斷卵子受精情況,當受精率小于50%時告知患者,經患者知情同意后實施補救性卵胞漿內單精子顯微注射技術(ICSI)。ICSI操作采取常規技術。37℃6%CO2培養箱中培養過夜,觀察卵子受精情況。胚胎評分采用傳統的Scott評分方法。胚胎培養第3天根據患者情況決定是否進行新鮮胚胎移植。所有剩余胚胎給予如下處理首先冷凍D3胚胎,標準為≥6細胞的1~2級胚胎。一般冷凍1~4支,若有剩余胚胎則全部進行囊胚培養。按照患者年齡決定每支載桿放置胚胎數量?!?8歲的患者一般每支放置2枚胚胎,反復移植仍然不孕的患者可移植3枚胚胎,部分載桿可放置3枚。>38歲的患者一般每支放置3枚胚胎。囊胚冷凍標準為D5和D6評分達4BC或4CB以上胚胎,所有達標準的囊胚均進行冷凍保存,每支放置1~2枚囊胚。

1、2、3 胚胎冷凍及復蘇方法使用Medicultvitrifica-tionkit產品。胚胎載體為載桿,冷凍方式為開放式。液氮取自無胚胎儲存的液氮儲存罐,用后全部棄掉。冷凍過程如下首先將冷凍液恢復至室溫,并準備好液氮及標記患者姓名、冷凍日期的載桿和冷凍支架。取1液、2液各50μl在無菌3001皿蓋上做成液滴,將要冷凍的胚胎置入1液中,停留3~5min,將胚胎轉入2液中,停留1min。在此1min內,將胚胎轉移至載桿的平板上(盡少量地吸取2液),迅速放入液氮,用鑷子蓋上外套管,置入液氮罐中保存。玻璃化復蘇使用Medicultvitrificationwarmingkit先將1液在37℃預溫,2~4液恢復室溫。準備一個4孔皿,2~4液各300μl置入對應的孔中待用。準備2/3高度的液氮1盒,將患者的冷凍管置入盒內,在液氮中將外套管拔下,以便暴露出載體平板上的胚胎。迅速將載桿置入1液中,輕輕在液滴中晃動,鏡下尋找到胚胎,停留3min。胚胎轉至2液、3液、4液中,各停留3min。最后將胚胎轉至移植皿中,放入37℃,6%CO2培養箱內至少2h再移植。

1、3 統計學分析應用SPSS11、5統計學軟件的Crosstabsχ2檢驗及單因素方差分析,P<0.05為差異有統計學意義。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Industry/1610.html
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