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菌種液氮冷凍保藏法

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2013-10-25 13:48:45 人氣:57 加入收藏 標簽:液氮冷凍

菌種液氮冷凍保藏法:

(1)準備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管,要求能耐受溫度突然變化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管,安瓿管的大小通常使用75×10mm的,或能容1.2mm液體的。

(2)加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時,則將空安瓿管塞上棉塞,1.05kg/cm2,121.3℃滅菌15分鐘:若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液,加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限,而后再用1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌15分鐘。

(3)接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液,裝入已滅菌的安瓿管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器,從平板內切取菌落圓塊,放入含有保護劑的安瓿管內,然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

(4)凍結再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍,則在細胞內會形成冰的結晶,因而降低存活率。

(5)保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器(圖Ⅶ-14)的小圓筒內,然后再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃,液態氮內為-196℃。

(6)恢復培養保藏的菌種需要用時,將安瓿管取出,立即放入38—40℃的水浴中進行急劇解凍,直到全部融化為止。再打開安瓿管,將內容物移入適宜的培養基上培養。

此法除適宜于一般微生物的保藏外,對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏,而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Industry/353.html
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