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液氮超低溫凍結保藏

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2014-05-29 9:29:06 人氣:92 加入收藏 標簽:液氮超低溫 液氮保藏

液氮超低溫凍結保藏

1. 凍存管的準備

進口2.0 ml已滅菌內螺旋凍存管。型號:Corning 2028, Corning公司。

2. 保護劑的準備

分析純甘油加純水配制成20%濃度,滅菌。

3. 微生物保藏物的準備

微生物不同的生理狀態對存活率有影響,一般使用靜止期或成熟期培養物。菌種的準備可采用下列兩種方法:

1)刮取培養物平板上的孢子或菌體,與保護劑混勻后加入凍存管內;

2) 接種液體培養基,振蕩培養后將菌懸液離心,去上清,將菌體與保護劑混合分裝于凍存管內。

每個凍存管的分裝量為1ml。

凍存管的標記為管外標記,用專用的非水溶性記號筆標記菌種保藏編號與保藏日期。

注意:分裝與標記時要多次核對該菌種與所分裝管的標記是否正確無誤。

4. 預凍

使用分段降溫法:將分裝后的菌種管先放4oC冰箱,半小時后放-20℃冰箱中2小時,然后放80oC冰箱2小時以上, 取出后放入液氮罐中快速冷凍。

對耐低溫的微生物可以直接放入氣相或液相氮中。

5. 保藏

將塑料凍存管置于液氮罐中保藏。一般氣相中溫度為-150℃,液相中溫度為-196℃。

6. 保藏周期

一般10年以上。

7. 復蘇方法

從液氮罐中取出凍存管,立即放置在38℃-40℃水浴中快速復蘇并適當搖動。直到內部結冰全部溶解為止,一般約需50秒-100秒。開啟凍存管,將內容物移至適宜的培養基上進行培養。

8. 適用范圍

各類微生物。

9. 液氮保藏應注意事項

防止凍傷,操作注意安全,帶面罩及防凍手套;

塑料凍存管一定要擰緊螺帽;

運送液氮時一定要用專用特制的容器,絕不可用密閉容器存放或運輸液氮,切勿使用保溫瓶存放液氮;

注意存放液氮容器的室內通風,防止過量氮氣使人窒息;

防止塑料凍存管破裂爆炸,如液氮滲入管內,當從液氮容器取出時,液態氮體積膨脹約680倍,爆炸力很大,應特別小心;

注意觀察液氮容器中液氮的殘存量,定期補充液氮。

10. 質量檢查

保存一段時間后抽取1-2支凍存管進行各項指標檢查,如存活率、生產能力、形態變異、雜菌污染等。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Industry/715.html
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