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液氮超低溫保存法是適用范圍最廣泛的微生物保存法

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2014-05-30 9:46:05 人氣:58 加入收藏 標簽:液氮 液氮超低溫保存法

大多數微生物都可以用超低溫來保存,超低溫保存法是適用范圍最廣泛的微生物保存法。需要復雜營養的微生物種,如用其他的貯存方法不能保持其活力(如植物的病原性真菌),通??捎贸蜏氐姆椒ū4妫ˋTCC1983;Halliday,Baker1985)。

此法是將凍存在小管或安瓿里的細胞以較慢的冷凍速率(1℃/分鐘)冷凍,直至—150℃,再將這些小管貯存在—150~-196℃的液氮中。超低溫的冷凍保護劑不同于凍干法所用的冷凍劑。ATCC常用一種由甘油(10%)、二甲亞砜(5%)和培養液制成的混合劑保存多數的細胞株。這些化學試劑進入細胞內可避免內膜的冷凍損傷。

貯存在低溫容器內的細胞復蘇時必須小心操作。當小管被加熱時,所形成的冰晶會將細胞殺死,正確操作就可避免這種事故。只要迅速將樣品解凍就能減少活力的丟失,做法是:將封口的小管迅速放入37℃的水中,直至所有的冰融化,然后打開管口,將內容物移入培養基。

超低溫保藏的微生物必須始終貯存在溫度非常低的環境中,因此需要液氮罐。在長期貯存的過程中必須經常注意補充液氮。這種貯存方式比凍干法需要更多的經費,包括為了維持貯存溫度所必要的勞動力和液氮等。

1材料

病毒超低溫保存所需材料有:熱收縮塑料管(NuncCryoflex),液氮罐,防護手套和面罩,永久性記號筆,氣體噴燈,裝液氮的保溫瓶。

2方法

(1)剪一段兩端各超出冷凍管長度2cm的熱收縮塑料管。

(2)將含有澄清病毒懸液(組織培養的上清培養基,或組織培養基內的細胞溶解產物均可)冰浴幾分鐘,用滅菌移液管將0.2ml冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內,并將蓋子擰緊。

(3)將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部,插入正確的標簽。

(4)用噴燈小心加熱熱收縮塑料管,并使之包住冷凍管。注意不要用太高的溫度加熱熱收縮塑料管。

(5)再小心加熱熱收縮塑料管的兩端,用大號鑷子夾緊管的端口至完全密封。

(6)將密封好的冷凍管快速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍(操作時要求戴面罩和手套)

(7)將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內,同時記錄樣品的詳細的存放位置、實驗編號和存放日期等。

(8)需要用時,迅速從液氮罐內取出所需樣品,并投入37℃水浴箱中解凍后,用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時不需要除去熱收縮塑料管。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Industry/716.html
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