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冷凍干燥菌種和液氮保藏菌種技術

作者:液氮罐tianchi 來源: 日期:2014-06-11 8:28:50 人氣:13 加入收藏 標簽:液氮保藏菌種

冷凍干燥菌種的轉接技術

建議用下列方法恢復培養冷凍干燥保藏的菌種。

一、安瓶管開封

1.用浸過70%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。

2.用火焰將安瓿管頂端加熱。

3.滴無菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。

4.用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。

二、菌株恢復培養

1.用無菌吸管,吸取0.3~0.5ml適宜的液體培養基,滴人安瓿管內,輕輕振蕩,使凍于菌體溶解呈懸浮狀。

2.取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養基內,然后在建議的溫度下培養。

3.若未能活化,或活化后有疑問時,請于收到菌種1個月內,通知保藏中心,經查證無誤后,即免費補寄。

三、注意事項

1.菌種活化前,請將安瓿管保存在6一10℃的環境下。

2.厭氧菌的培養,如無特別說明,自開封至接種完成,均需以無氧氣體充填,以保持厭氧狀態。

3.某些菌種經過冷凍干燥保存后,延遲期較長,需連續兩次繼代培養才能正常生長,此時請將步驟二(2)重復一次。

液氮超低溫保藏程序

1、容器的選擇:使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。

2、檢查安培瓶是否滲漏:用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鐘,沖洗干凈,棄去含有藍色染料的安培瓶,其余的安培瓶備用。

3、打印標簽(激光打?。?。

4、容器的滅菌:先用蒸餾水漂洗干凈安培瓶,再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鐘,干燥并將打印好的標簽放入安培瓶中,略擰緊螺旋蓋,再行121℃滅菌30分鐘。

5、保藏菌菌齡:處于最大生長量階段或對數生長期后期。

6、保護劑:選用5-10%的甘油或二甲基亞砜作保護劑。

1)甘油的準備:在121℃滅菌15分鐘,2-8℃貯存。甘油一般以兩倍最終所需濃度的水溶液保存,然后與同等量的細胞懸液混合。若不用細胞懸液,則以最終所需濃度的水溶液保存。

2)二甲基亞砜:用0.22um的聚四氟乙烯過濾膜過濾除菌。過濾膜預先用甲醇和二甲基亞砜漂洗。無菌的二甲基亞砜以10-15ml裝量2-8℃避光保存。

7、分裝:在無菌條件下,將細胞懸液(從平板上打下直徑為5cm的菌塊)分裝于安培瓶中,并注入保護劑,擰緊螺旋蓋。

8、將安培瓶固定在鋁夾上,貼好標簽。為了便于取用,一般一個鋁夾上僅放一個菌株。

9、將控溫系統先預冷到4℃,再將鋁夾放入其中。以每分鐘1℃降溫至-40℃,然后以每分鐘10℃降溫至-90℃。降溫以后,將鋁夾轉移至處于液氮中的儲存器中保存。

10、菌種的復活:將液氮保藏的菌種取出,迅速放入37℃水浴中解凍。一般需2至2.5分鐘,等完全解凍后,再及時轉接到合適的培養基中培養。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Industry/731.html
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