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液氮超低溫保藏菌種的方法

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2014-12-22 8:09:03 人氣:1045 加入收藏 標簽:液氮 液氮超低溫

   液氮超低溫保藏就是將菌種密封在有保護劑的安瓿管內,經控制速度凍結后,在-150℃~-196℃液態氮超低溫罐中保藏。

   1.菌種制備

   保藏孢子時,取孢子制成懸液,加入保護劑,裝入無菌安瓿管內。保存菌絲體時,用液體振蕩法培養菌絲球,或用平板培養菌絲體,也可用麥粒菌種。取適量放入無菌的裝有保護劑的安瓿管內。

   2.安瓿管

   制作安瓿管的玻璃,要具有經受溫度突變而不破裂、容易用火焰熔封管口、恢復培養時容易打開的特點。一般采用硼硅玻璃,管的大小根據需要而定,通常是75毫米×10毫米或能容1.2毫升液體的安瓿瓶比較合適。選好安瓿管后,每管加進0.8毫米保護劑,塞上棉塞,在1千克/平方厘米壓力下滅菌15分鐘,供凍結瓊脂菌絲片或麥粒菌種用。如凍結孢子懸液時,則空管滅菌。

   3.保護劑

   用體積比10%甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液作保護劑。

   4.凍結保藏

   將上述準備好的菌種以無菌操作移入加有保護劑的安瓿管中,用火焰將安瓿管上部熔封,浸在水中檢查有無漏氣。然后將封口的安瓿管放在慢速凍結器內,控制凍結速度,一般每一分鐘降低1℃,使樣品逐步均勻地凍結到-40℃。-40℃以下的凍結速度,可不用控制而迅速下降。安瓿管凍結后,立即放入液氮罐中。罐內的氣相溫度為-150℃,液體溫度為-196℃。

   5.恢復培養

   需要使用保藏菌種時,將安瓿管從液氮罐中取出,立即放入33~40℃的水浴中振蕩至管內凍結物全部融解,開啟安瓿管,將管內菌種接入適宜培養基培養即可。

   液氮超低溫保藏是目前長期保藏菌種的最好的一種方法,用它進行保藏各類食用菌的菌種都獲得了滿意的結果。

   目前常用的液氮罐的容積有10升、35升兩種,也有更大的,如美國菌種保藏委員會(ATCC)使用的容積達250升和650升。常用的備用液氮罐容積為10~35升,也有100升的。由于液氮來源困難、液氮罐設備費用大,目前這種保藏方法還未廣泛普及使用??梢粤私飧嚓P于液氮超低溫保存原理。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Problem/1025.html
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