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超低溫冷凍療法常用的冷凍降溫方法

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2016-10-24 8:03:12 人氣:117 加入收藏 標簽:超低溫冷凍法 液氮

研究表明,不同材料采用超低溫冷凍法脫毒時冷凍降溫方法直接關系到成苗率,選擇合適的冷凍方法對脫毒成功與否至關重要。不同冷凍降溫方法各有優缺點,根據材料特性選擇適合的方法。目前常用的冷凍方法有:快速降溫法、慢速冷凍法、逐級冷凍法、干燥冷凍法、玻璃化冷凍法、包埋玻璃化法等。直接將預培養材料投入液氮中的快速降溫法具有操作簡單、不需要特殊設備的優點,但是對含水量高的愈傷組織其成活率為零,不適用該方法。

將材料從0℃逐漸降到-100℃,使得其細胞中的含水量逐漸流出到細胞外,細胞中的含水量降到最低程度,然后再從-100℃直接投入液氮中降到-196℃,這樣可以避免水分在細胞中結冰而破壞細胞,這種慢速冷凍法可以提高成活率。一般細胞在-10℃時細胞外的介質基本形成結晶,而細胞內部并未結冰,這樣形成細胞內外的蒸氣壓差,如果使細胞在不同低溫下-20,-50,-70,-100℃下各處理一段時間,使細胞內的水溶液在蒸氣壓下向細胞外不斷擴散,脫水后細胞內原生質逐漸發生濃縮,其冰點降低,再投入液氮中時就減弱低溫結冰對細胞造成的傷害,大大提高回復率和成活率,這種逐級冰凍方法在多數材料超低溫保存中獲得成功。對于含水量較高的愈傷組織,采用將材料進行脫水預處理,然后迅速投入液氮。這樣細胞經過脫水處理后細胞內部含水量大大降低,原生質的濃度大大提高,提高愈傷組織的冷凍處理后的恢復成活率。用一種保護劑PVS2[其組成為:30%(W/V)甘油+15%(W/V)乙二醇+15%(W/V)DMSO+0.4mol/L蔗糖]對材料進行處理后再迅速投入到液氮中,細胞經過保護劑處理后可以避免細胞胞內外形成冰晶,而形成玻璃化狀態,這種方法成活率高,但是很容易脫水過度,影響成活率,采取與逐級冷凍法結合處理來提高恢復率。當材料較多時,可以先采用褐藻酸鈣將材料進行包埋,然后用高蔗糖濃度的培養基脫水預處理,再用干燥的硅膠進行脫水處理,再迅速投入到液氮中。為了保證成活率,經常結合幾種冷凍降溫方法合并使用。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Problem/1589.html
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