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沒有液氮罐如何凍存細胞

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2014-08-11 11:50:11 人氣:1296 加入收藏 標簽:

沒有液氮罐如何凍存細胞?不用液氮罐,在冰箱如何凍存4度/-20度/-70度各放多久???

如果不用液氮罐,可以用-70。我們是這樣做的,將細胞轉移至凍存管中,在-20放置半小時到一小時左右,預凍。之后放入-70中,我們嘗試過載-70中放置1年的細胞沒有問題,復蘇之后狀態尚佳。至于更長時間我們沒有嘗試過,但是老板說1年半沒問題,在國外他試過。

細胞凍遵循:慢凍速溶的原則。

還可以拿毛巾包著凍存管就可以直接放進-70,即可以遵循細胞凍慢凍速溶的原則,又比較方便,不用先放-20,因為是慢慢凍進去的,所以能更好的達到梯度凍存。

實際上,我認為慢凍速溶原則是正確的。
慢凍是要給DMSO以滲透入細胞的時間,所以我的經驗是4度的半小時要保證,之后就基本上可以馬上凍起來也沒有什么關系了。
毛巾包裹法十分新穎,呵呵。不過,從原理上看,確實是值得嘗試的好方法,既保證了時間,又省去了搬來搬去的麻煩。
至于-80度的保存時間,我親眼所見,半年絕對沒有問題。

在4度的情況下,要看你是什么細胞了,如果是老鼠的細胞可以放1小時左右,其他細胞最多半小時(本人做過試驗的);在-20度的情況下,老鼠的可以放1天左右,其他細胞半天,但其狀態不是很好了;在-70度的情況下,老鼠的細胞可以放1到2年,在此期間要復蘇一次看其生長情況,其他細胞最多一年了!

1. 選用對數生長期細胞,在收集細胞24小時前換液一次。
2. 用常規方法將細胞消化下來,按(1~5)×106/ml濃度、懸浮于含有10% DMSO的小牛血清或生長液中。凍存的細胞數量要充分,因復蘇時接種的細胞數量應比平常多一些。
3. 用吸管吸取細胞懸液,分裝于無菌安培管中(沒管1ml),嚴密封口,放入三層紗布小袋,注明細胞名稱和凍存時間,便于以后查找。
4. 凍存 當前已有專用細胞凍存器,能精確地控制凍存溫度。在無凍存器的情況下,可用手工方法。從把安培懸液在液氮容器口開始,在30~40min內,下降到液氮表面,在停30min后,直接投入液氮中?;蛳葘才嘁迫胍旱蘅陬i部氣相中過夜,次日將紗布袋緩慢下降至液氮中,歷時3分鐘。在液氮中可長期保存。 若沒有液氮,可存于-80冰箱內,不過注意保存時間,比液氮短,可保存3個月左右。

本文網址:http://www.thomastrials.com/Problem/830.html
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