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液氮保藏法是目前保存微生物菌種最可靠的方法

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2014-03-08 9:53:19 人氣:221 加入收藏 標簽:液氮保藏法

液氮保藏法是目前保存微生物菌種最可靠的方法,多數國家級菌種保藏單位都采用此法。

1 準備安培管用于液氮保藏的安培管,要求能耐受溫度突然變化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm 的安培瓶。

2 加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時,則將空安培管塞上棉塞,在壓力0.11MPa,溫度121℃條件下滅菌15min;若保存霉菌菌絲體則需在安培管內預先加入保護劑,如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液,加入量以能浸沒以后加入的菌種塊為限,而后再進行高壓滅菌。

3 接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液,裝入已滅菌的安培管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器,從平板內切取菌落圓塊,放入含有保護劑的安培管內,然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

4 凍結再將已封口的安培管以每分鐘下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍,則在細胞內會形成冰的結晶,因而降低存活率。

5 保藏經凍結至-30℃ 的安培管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內,然后再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃,液態氮為-196℃。

6 恢復培養保藏的菌種需要用時,將安培管取出,立即放入3840℃的水浴中進行急劇解凍,直到全部融化為止。再打開安培管,將內容物移到適宜的培養基上培養。

此法除了適宜于一般微生物的保藏外,對于一些用冷凍干燥法都難以保藏的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞都可長期保藏,而且不易發生變異。缺點是需要特殊設備。

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