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液氮冷凍治療小鼠實體型肝癌機制探討

作者: 來源:轉載 日期:2014-05-06 9:09:12 人氣:15 加入收藏 標簽:液氮冷凍治療

提要:對小鼠肝癌模型進行7液氮冷凍治療和對照研宄。:爭凍蛆腫瘤直徑、體積殉明顯小于甘照蛆, 腫瘤切面呈大片狀壞兄, 光鏡觀察腫瘤有壞死, 纖堆化,并有大量淋巴細胞、裝細胞浸潤, 包固壞死區} 電鏡發現癌細胞器有顯著改變,細胞和胞披目縮,棱碎裂、細胞壞兄咀及筏元原纖堆形成等現垂。說明冷凍對小鼠肝癌的治療確有療效, 者臨麻肝癌的冷凍治療提供了理論依據。

近十幾年來冷凍外科廣泛應甩于臨床,但深部內臟實體癌,如肝癌冷凍治療機制的討還較少。我們進行了冷凍治療小鼠實體型肝癌的實驗研究, 以探討冷凍治療腫瘤的機制b 改進和提高臨床工作。

材料與方法

1、宴磷動物: 昆明種雄性小鼠50只, 1十月齡。 體重l7~22 。由北京軍事醫學科學院動物房提供。

2。 小鼠肝癌模型 瘙株為H22型盱癌腹水型(北京市腫瘤防治所供培)。 選用傳代后5~ 7天的種鼠, 在無菌條件下穿刺抽坦承, 甩生理鹽承稀釋制備瘤椿懸掖,使 }瘤細胞達到i~ l0 /0。2越l的標準范甩內。每只小鼠左側腋窩皮下組織內注入溜株懸渣O。2mI(2。5×1( 細咆/且)。接刊一罱七天-選用瘤塊璺球形,直徑0。5cm太小的小鼠24晟。J殖機分組,每組I 2只。(1)冷臻組t進行}々陳治療;(2)對照紐:只手術暴囂腫摺,不冷凍

3。 冷凍方法:兩組動物均進行手術。術前局部剪毛, 己醚吸入麻醉 術前20丹鐘每只實酶小鼠嵌腔內注入研耗。麻辭后固定在專用手術臺上,局部碘酒、酒精消毒, 口璉l c 暴露腫溜表面。冷珠組使用W E一2液氮磚凍治療器, 進行接觸式猙凍。 癌塊周圍皮膚及前肢』雕少布妥善保護??焖俳禍匾环昼娮笥倚纬杀?,持續接觸2~ 3丹鐘,冷凍范融均超過瘤塊邊緣。 使用熱電塌測溫儀蒯溫。瘤塊中心溫度達一40℃ 。邊緣溫度選一2O℃ 。冰球待其自然緩慢復溫 球融二次。對照皺位做 冷凍組相同的暴露瘤塊手術, 兩組癌塊暴露時間相同,平均1O分鐘。 傷口問斷縫合, 外潦苦昧酸及業棉睦。

4。觀察指標

(1)瘤塊直徑的動態觀察:手術后5天, 局部水腫消退。 鼎丑用游標卡尺測量癌城點輕,并謝量悻重變化。

(2)腫瘤體積壞死 浸潤和轉移情況 手術三閣后將兩組動物全部拉頸處死。 進行殺糖解剖。用量柿潮量每只小鼠的餾塊體積。記錄瘸塊壞死面秘、胸肌沒潤、縱隔浸嗣、張遠處轉移情2足。

(3) 組織學觀察: 實赫案柬后。取兩組動物的瘸塊。 肝 時, 腎。 甩i 和 酷讒液和2怕虎二晤藩液固定 常 進行光學顯做魄椰遙射電鏡朋察。

結 果

一、臨床觀漿t冰球復溫后腫瘤呈紫紅色、表面稍有滲血, 用紗布輕壓即可止血。術后24小 時瘤塊周嗣發難水腫, 4~ 5天后消退 兩短小鼠傷口未發生感染、術活出血及傷l 裂開。術后局部水腫消退后對瘤塊直徑動態觀察, 兩組瘤塊直徑于手術后6、i 、2】天進行比較, 冷凍組癌塊生長明顯受到抑制, 顯著抑制者占4o% (直徑小于0。5CIl1)。與對照組比較, 差別有高度顯著性(P< o。0】)。

二、宏觀病理學:

在實驗結束時(術后22天)觀察結果如下:

1。 對照組, 瘤塊星灰自色, 大結節狀, 無完整包膜。全部腫瘤浸潤胸壁肌肉及局閣組織, 浸入縱隔的占5o J腫瘤體積較大,平均體積為3。69±0。23cm ,切面見30%的腫瘤有散在的乳自色 狀壞死灶。

2。 冷凍組: 腫瘤星灰白色、結節狀。大部分腫瘤組織對皮膚,肌肉和胸壁等無浸潤, 其中浸入縱隔的占Io ; 腫瘤較小, 平均體積為1。5l±0。4gcm。(t測驗與對照組比較, P<0。03)J 切面腫瘤組織中央呈大片狀壞死者占80 , 有的已經液化吸收上述兩姐動物宏觀檢查肝、肺, 腎來見明顯腫瘤轉移灶。

三、組織病理學觀察:

1。 對照組; 腫瘤緬胞增殖活躍,腫瘤中心有點狀壞死, 有較薄的纖維組織包膜,基本無纖維組織向腫瘤內伸人,腫瘤周圍有少量淋巴細胞、 漿細胞浸潤。 肺內轉移占2o% (2/to)。。

2。 冷凍組。腫瘤細胞大部壞死,周邊纖準組織增生, 并有大量淋巴細胞, 漿細胞浸潤、包圍壞死區。部分動物腫瘤纖維包膜內仍有一帶腫瘤細胞增殖活躍。有的基本纖維億, 僅有少量癌細胞,纖維組織內毛鈿血管、小動、靜脈內皮細胞增生,管腔閉塞}小勁、靜脈營壁玻璃祥變或纖維性增厚 皮下結締姐綴內的血管改變與腫瘤內的相似。

四, 呻瘤組織超微結掎的改變:

1。 對照組; 瘟細胞排列緊密, 表 有多量微絨毛}胞漿內有多量核糖濰、祖j對內質網, 線粒體橢圓形,輪廓清晰, 嵴結構清楚, 部分線粒體腫脹, 蠟結構不清楚, 胞校兩臟膜間隙較窄, 外形規則, 異染色質呈團塊狀, 位于核魔下。

2。 冷凍組: 組織水腫, 細胞排列疏松'微絨毛高度腫脹 融解、消失、胞漿內有較多的脂滴形成, 粗面內質網減少、擴張和脫顆粒,絨粒體高度腫脹, 嵴消失、空泡變往, 細胞和胞棱固縮, 此外可見胞核溶解和核碎裂等緬胞壞死現象, 同時伴有機化, 腔元躁纖維形成。變性瘤細胞漿內溶酶體增多。

討 論

一、冷藏治療對小鼠實體型]}于癌有效;冷凍外科的問世, 為惡性腫瘤的治療開辟了新的途徑。本組實驗結果表明, 液氮冷凍使癌細胞發生不可逆漸進性及凝固性壞死。冷凍導致細胞死亡的主要原因, 是由于細胞內外微晶形成,細胞脫水和皺縮, 電解質毒性濃縮,細胞脂蛋白成份變性,血流瘀積和微血控形成等。

二、進一步提高冷凍治療腫瘤的效果·我們發現, 冷凍后少數癌塊壞死的周邊仍存在瘸細胞, 這可能是出于冷凍時將塊周邊溫度為一2O℃, 溫度不夠低,不足以殺死溜細胞。一般認為要在一50℃ 左右(一4o~一80℃) “”J。所以, 今后需要進一步改進冷凍技術設備,提高技術水平,避一步降低溫度。

本文網址:http://www.thomastrials.com/shiyan/682.html
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