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微生物液氮超低溫保存研究進展

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2014-07-24 17:31:37 人氣:25 加入收藏 標簽:液氮 液氮超低溫

摘要:茵種保存是微生物研究中的一項基礎工作。在一196℃下活細胞物質代謝和生長幾乎完全停止,液氮超低溫保存使微生物的長期穩定保存成為可能。作者就影響乳酸茵、酵母茵、微藻,原生動物液氮超低溫保存存活率的因素進行了討論。此外太子彩票网址,作者還討論了液氮超低溫保存中還存在的一些問題太子彩票网址。

關鍵詞:液氮超低溫保存;乳酸茵;酵母菌;微藻類;原生動物中

為保證生產應用及科研需要太子彩票网址,獲得并保持優良菌種成為一項重要的工作,這就需要長期保持菌種不發生變異,包括菌種的形態、生理生化太子彩票网址、遺傳特性等。微生物菌種保藏方法很多,但從總體上可分為4大類:傳代法、干燥法、冷凍法及冷凍干燥法。冷凍干燥保存法和冷凍保存法是目前公認的長期保存微生物菌種的最安全、可靠的方法太子彩票网址。其中冷凍保存法中的液氮超低溫保存法適用范圍廣,可用于大多數微生物太子彩票网址,特別是對冷凍干燥較困難的微生物。因此該方法已經成為長期保存微生物菌種的最佳方法。

液氮超低溫保存原理

微生物超低溫保存研究進展

結語

傳統保護劑對細胞都有一定的毒害作用,研究人員發現了具有抗凍作用的新型保護劑:抗凍蛋白(AFP)[孔一6]和冰結合蛋白(IBF)[2卜29]。AFPs具有與冰晶結構相似的性質并且可以降低冰晶以針狀沿中心軸生長的速度,IBF則可以抑制再結晶,從而保護細胞膜。目前廣泛使用的極地魚抗凍蛋白由于價格昂貴受到限制,而從微生物中提取抗凍蛋白可大大降低成本,其將成為研究的熱點并取代魚蛋白而占有市場。雖然液氮超低溫保存體系的研究已經較為深入、成熟,并且為自然資源的長期保存做出了重大的貢獻,但是仍然存在一些問題需要引起人們的關注。

(1)經常使用的液氮是未經滅菌的,將裝有材料的冷凍管浸入到液氮中時,液氮可能滲透到管中引起微生物污染;

(2)微生物長期保存不僅要保證菌株的生理性狀還要保證遺傳信息的完整性,保藏過程中僅以活性指標判斷微生物是否保藏完好有些片面。StoychevaE3z]研究發現,將酵母菌Saccharornycescerevisi投入到液氮中進行快速冷凍無突變被誘發。然而在4℃下預凍2 h,然后一10℃下冷凍1 h,再在一20℃下放置16 h的逐級降溫過程中易誘導線粒體rho一突變體生成。

同時,StamenovaE33]也發現慢速冷凍和逐級冷凍下,線粒體氧化磷酸化、超氧化物陰離子的積累導致基因組Tyl轉座子轉移太子彩票网址。然而研究者往往只重視存活率和生理生化性能的穩定太子彩票网址,卻忽視了對基因組變化及完整性的檢測。隨著分子生物學的發展,利用PCR、AFLP太子彩票网址、RFLP等分子標記技術檢查基因組變化已經成為可能。因此使用生理生化穩定性和基因組完整性這個雙重指標評價一個保存方案的可行性是必要的太子彩票网址。

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