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液氮罐凍存樣品的方法與注意事項

作者:天馳液氮罐 來源:原創 日期:2014-08-09 11:31:04 人氣:1361 加入收藏 標簽:液氮罐凍存 液氮罐凍存樣品

  液氮罐凍存樣品的方法 :(以獨立樣品pc12為例)

  1、選擇處于對數生長期的細胞。一般長約為70%-80%即可凍存,細胞數目過少或過多都不宜凍存,因為復蘇后細胞生存率會降低;收集細胞24小時前換液一次。

  2、用培養液直接將細胞消化下來,離心,1000轉, 5min;

  3、吸去上清,在離心管中加入凍存液,(凍存液配制按照60%已過濾的培養基 + 10%DMSO+ 10%胎牛血清+20%馬血清配置凍存液(其中DMSO要自己配置), 4度保存備用。),加入凍存液后吹散計數,控制細胞懸液密度為5*106或1*107左右(不過有人建議其實不必要細胞計數,根據細胞的多少,估計一下一瓶細胞凍存幾支就行了,細胞密度高一點比較好,操作時間短,對細胞損傷小。), 細胞懸液以1ml的量分裝入凍存管中(每個凍存管添加不超過1-1.5m),在凍存管上標記凍存日期,姓名以及細胞種類。最好選擇進口的凍存管;

  4、要嚴密封口,慢凍過程(1.先將凍存管放入4℃冰箱,約1H。 2.接著置于-20℃冰箱,約40min-1h。 3.置于-80超低溫冰箱中放置過夜。 4.置于液氮罐中長期保存。) , 注意將凍存管豎立于合適大小的不銹鋼飯盒中,應避免凍存管倒立。

  液氮罐凍存樣品的注意事項:

  1、使用DMSO前,不需要進行高壓滅菌,它本身就有滅菌的作用。高壓滅菌反而會破華它的分子結構,以至于降低冷凍保護效果。在常溫下,DMSO對人體有害,故在配制時最好戴上手套操作。最好使用前將DMSO4度凍一下,對細胞的毒性會減少。

  2、不宜將凍存細胞放置在0℃~-60℃這一溫度范圍內過久,低溫損傷主要發生在這一溫度區內,是“危險溫區”。

  3、注意定期檢查液氮罐內液氮量,及時添加。

  4、多余的凍存液可以4度保存備用。

本文網址:http://www.thomastrials.com/zhichi/828.html
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